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一、 產(chǎn)品基礎(chǔ)信息描述
• 產(chǎn)品貨號(hào)：ab150077
• 英文全稱：Goat anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488)
• 中文命名：Alexa Fluor® 488標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（H+L）
• 品牌歸屬：Abcam
• 宿主來源：山羊（Goat）
• 靶向種屬：兔（Rabbit）
• 抗體特異性：靶向IgG的重鏈（Heavy Chain）與輕鏈（Light Chain），即H+L
• 偶聯(lián)熒光基團(tuán)：Alexa Fluor® 488
• 純化方式：抗原親和純化（Immunogen affinity purified）
• 抗體克隆性：多克隆抗體（Polyclonal），同型為IgG
• 物理形態(tài)：液體（含23%甘油、PBS、1% BSA以及0.02%疊氮鈉防腐劑）
• 激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)：Ex/Em = 495 nm / 519 nm
• 推薦規(guī)格：常見規(guī)格為500 μL（具體以實(shí)際采購包裝為準(zhǔn)）
二、 核心產(chǎn)品特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)剖析
1. 明亮且穩(wěn)定的熒光輸出
借助經(jīng)典的Alexa Fluor® 488熒光染料，ab150077展現(xiàn)出出色的摩爾消光系數(shù)與熒光量子產(chǎn)率。與傳統(tǒng)FITC相比，其光穩(wěn)定性顯著提升，這意味著在激光照射下不易發(fā)生光漂白，為您爭(zhēng)取了更充裕的圖像采集與觀察時(shí)間，尤其適合低豐度靶點(diǎn)的微弱信號(hào)捕獲。
2. 寬泛的pH耐受性
實(shí)驗(yàn)環(huán)境的酸堿度往往會(huì)影響熒光集團(tuán)的發(fā)光效率。Alexa Fluor® 488在pH 4.0至10.0的區(qū)間內(nèi)均能保持良好的熒光強(qiáng)度，最佳表現(xiàn)區(qū)間為pH 6.5-8.5，這賦予了其實(shí)驗(yàn)條件普適性。
3. 極低的種屬交叉反應(yīng)
作為經(jīng)過嚴(yán)格親和純化的山羊源二抗，ab150077對(duì)人、小鼠、大鼠、倉鼠、牛、馬、豬、猴等多種常見實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的IgG均表現(xiàn)出極低的交叉吸附（Pre-adsorbed），極大程度地壓低了非特異性結(jié)合的背景噪音。
4. 多平臺(tái)應(yīng)用的“多面手"
無論是在細(xì)胞水平進(jìn)行精細(xì)定位，還是在懸液體系中分析細(xì)胞亞群，亦或是在組織切片上探尋抗原分布，這款二抗均能提供穩(wěn)健可靠的信號(hào)放大作用。
三、 工作原理與信號(hào)放大機(jī)制
要駕馭好一款工具，首先要洞悉它的底層邏輯。ab150077的工作原理建立在免疫學(xué)抗原-抗體特異性結(jié)合的基礎(chǔ)之上。
在一抗（Primary Antibody）與目標(biāo)抗原（Target Antigen）發(fā)生特異性結(jié)合后，一抗的恒定區(qū)（Fc段）或可變區(qū)（Fab段）會(huì)成為新的抗原表位。此時(shí)，帶有熒光標(biāo)簽的ab150077作為二抗，能夠精準(zhǔn)識(shí)別并結(jié)合一抗的IgG骨架。由于每個(gè)一抗分子上可以結(jié)合多個(gè)二抗分子，這種級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)使得初始的抗原信號(hào)得到了指數(shù)級(jí)的增強(qiáng)。
具體而言，當(dāng)使用488 nm波長(zhǎng)的激光（如流式細(xì)胞儀的氬離子激光器）或汞/氙燈光源激發(fā)時(shí)，ab150077上的Alexa Fluor® 488染料吸收光子能量，其電子躍遷至激發(fā)態(tài)。當(dāng)電子回落至基態(tài)時(shí)，便會(huì)釋放出波長(zhǎng)為519 nm的光子，即我們?nèi)庋鬯姷拿髁辆G光。通過檢測(cè)器或?yàn)V光片（如流式常用的525/30 nm帶通濾光片），即可將這種光信號(hào)轉(zhuǎn)化為定量數(shù)據(jù)或可視化圖像。
四、 攻克實(shí)驗(yàn)痛點(diǎn)：它能為您解決哪些問題？
• 痛點(diǎn)一：信號(hào)太弱，找不到陽性細(xì)胞
對(duì)策：得益于高亮度的Alexa Fluor® 488標(biāo)簽，ab150077能夠敏銳捕捉低表達(dá)量的目標(biāo)蛋白，讓微弱信號(hào)無所遁形。
• 痛點(diǎn)二：背景太高，特異性差
對(duì)策：通過優(yōu)化的純化工藝，該二抗有效去除了雜抗體和非特異性結(jié)合位點(diǎn)，配合其極低的種屬交叉反應(yīng)，能夠幫助您獲得高信噪比的干凈圖譜。
• 痛點(diǎn)三：拍照時(shí)熒光猝滅太快
對(duì)策：其光穩(wěn)定性允許您進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的共聚焦Z-stack掃描或3D重構(gòu)，而不必?fù)?dān)心信號(hào)在拍攝過程中迅速衰減。
• 痛點(diǎn)四：多色panel設(shè)計(jì)困難，光譜串色嚴(yán)重
對(duì)策：Alexa Fluor® 488的光譜峰形尖銳，與常見的細(xì)胞核染料（如DAPI）以及橙/紅色染料（如Alexa Fluor® 594、Texas Red）的光譜重疊極小，是構(gòu)建多色實(shí)驗(yàn)體系的理想之選。
五、 全流程使用方法與操作建議
1. 免疫熒光 / 免疫細(xì)胞化學(xué) (ICC/IF)
• 推薦稀釋比例：1/200 - 1/1000（例如：1 µg/mL - 2 µg/mL的工作濃度）
• 操作步驟：
1. 樣本固定與透化：根據(jù)目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞定位，選擇合適的固定劑（如4%多聚甲醛）和透化劑（如0.1% Triton X-100）。
2. 封閉：使用含1%-3% BSA或正常山羊血清的PBS溶液封閉30-60分鐘，以阻斷非特異性結(jié)合位點(diǎn)。
3. 一抗孵育：棄去封閉液，加入用封閉液稀釋好的一抗，4℃過夜孵育。
4. 二抗孵育：PBST洗滌三次后，加入用封閉液稀釋的ab150077，室溫下避光孵育1小時(shí)。
5. 復(fù)染與封片：再次洗滌后，使用DAPI進(jìn)行細(xì)胞核復(fù)染，然后用抗熒光猝滅封片劑封片觀察。
2. 流式細(xì)胞術(shù) (Flow Cytometry)
• 推薦稀釋比例：1/2000 - 1/4000
• 操作步驟：
1. 細(xì)胞制備：獲取單細(xì)胞懸液，用4%多聚甲醛進(jìn)行表面抗原固定。
2. 透化（針對(duì)胞內(nèi)標(biāo)志物）：若檢測(cè)胞內(nèi)因子，需用90%預(yù)冷甲醇或?qū)Ｓ猛富瘎┨幚怼?/span>
3. 封閉與一抗孵育：用含10%正常血清的PBS封閉15分鐘，隨后加入一抗，室溫避光孵育30-60分鐘。
4. 二抗孵育：PBS洗滌后，加入稀釋好的ab150077，室溫避光孵育20-30分鐘。
5. 上機(jī)分析：最后用PBS洗滌1-2次，重懸于500 µL PBS中，轉(zhuǎn)移至流式管中上機(jī)檢測(cè)（FITC通道）。
3. 免疫組織化學(xué) (IHC-Fr / IHC-P)
• 推薦稀釋比例：需根據(jù)具體組織及一抗效價(jià)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索（常規(guī)范圍多在1/200 - 1/1000）。
• 操作要點(diǎn)：石蠟切片需先進(jìn)行脫蠟、水化及高溫抗原修復(fù)（如檸檬酸鈉緩沖液，pH 6.0或Tris/EDTA緩沖液，pH 9.0）。后續(xù)封閉、一抗/二抗孵育及復(fù)染流程與IF類似，需注意全程避光操作。
(注：以上稀釋比例僅供參考，實(shí)際最佳工作濃度需根據(jù)一抗的效價(jià)及具體實(shí)驗(yàn)體系通過滴定實(shí)驗(yàn)確定。)
六、 儲(chǔ)存條件與試劑養(yǎng)護(hù)指南
熒光試劑極其脆弱，科學(xué)的儲(chǔ)存方式直接關(guān)系到試劑的壽命與實(shí)驗(yàn)的成敗。
• 運(yùn)輸條件：產(chǎn)品通常采用藍(lán)冰（Blue Ice）冷鏈運(yùn)輸，以防溫度波動(dòng)造成抗體變性或熒光淬滅。
• 短期儲(chǔ)存（1-2周內(nèi)）：置于2°C - 8°C冰箱冷藏即可。
• 長(zhǎng)期儲(chǔ)存：收到產(chǎn)品后，建議根據(jù)單次實(shí)驗(yàn)用量進(jìn)行分裝（Aliquot），保存于-20°C。在此條件下，試劑可穩(wěn)定保存12個(gè)月。
• 避光要求：Alexa Fluor® 488對(duì)光敏感，無論在液態(tài)儲(chǔ)存還是實(shí)驗(yàn)操作過程中，均需嚴(yán)格避光（可包裹鋁箔紙或使用棕色管）。
• 禁忌事項(xiàng)：絕對(duì)避免反復(fù)凍融！反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體蛋白聚集變性，不僅嚴(yán)重削弱結(jié)合能力，還會(huì)增加非特異性背景。
七、 常見問題排查與解決方案 (Troubleshooting)
問題一：背景信號(hào)過高，整個(gè)視野一片綠（高背景）
原因分析與對(duì)策：這可能是二抗?jié)舛冗^高導(dǎo)致的。建議進(jìn)行濃度梯度摸索，降低二抗稀釋比例（如從1:200降至1:500或更低）。另外，封閉不充分也是罪魁禍?zhǔn)?，可適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間至1-2小時(shí)，或提高封閉液中BSA/血清的濃度。此外，洗滌不夠極易殘留游離二抗，務(wù)必增加洗滌次數(shù)（如增至5次）并延長(zhǎng)每次浸泡洗滌的時(shí)間。
問題二：陽性信號(hào)微弱甚至檢測(cè)不到
原因分析與對(duì)策：首先確認(rèn)一抗是否有效結(jié)合，可設(shè)置一抗陽性對(duì)照。其次，檢查二抗是否失活，避免將其長(zhǎng)時(shí)間暴露在強(qiáng)光或高溫環(huán)境下。如果細(xì)胞/組織通透不足，一抗無法進(jìn)入，也會(huì)導(dǎo)致信號(hào)缺失，此時(shí)需優(yōu)化透化劑（如Triton X-100）的作用時(shí)間與濃度。
問題三：流式檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)大量雙峰或異常高值
原因分析與對(duì)策：這往往是因?yàn)榧?xì)胞成團(tuán)或未充分吹打?yàn)閱渭?xì)胞懸液所致。在加入二抗前，務(wù)必確保細(xì)胞經(jīng)過充分的過濾（如使用40 µm細(xì)胞篩）或輕柔吹打。同時(shí)，檢查二抗是否發(fā)生聚集，若長(zhǎng)期儲(chǔ)存不當(dāng)，高濃度的甘油可能導(dǎo)致試劑析出，上機(jī)前可進(jìn)行短暫離心（10,000 g, 5分鐘）取上清使用。
關(guān)鍵詞：Abcam、艾博抗、abcam抗體、二抗、免疫熒光二抗、Alexa Fluor 488二抗、山羊抗兔二抗、熒光二抗、細(xì)胞成像試劑、流式抗體、免疫組化二抗、多重染色二抗、低背景二抗、光穩(wěn)定二抗、Alexa Fluor 488標(biāo)記抗體、ab150077、山羊抗兔IgG、免疫檢測(cè)試劑、二抗推薦、科研抗體
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??Abcam熱賣產(chǎn)品
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
ab150077 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) | 500ug | Abcam |
ab6721 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) (ab6721) | 1mg | Abcam |
ab212165-1x96tests | Human Lipoprotein A ELISA Kit | 1x96tests | Abcam |
ab150113 | Goat polyclonal Secondary Antibody to Mouse IgG - H&L (Alexa Fluor® 488) | 500ug | Abcam |
ab190289 | Anti-c-Fos antibody (ab190289) | 100ul | Abcam |
ab6789 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) | 1mg | Abcam |
ISB1L(ab119211) | InstantBlue | 1L | Abcam |
ab177487-100ul | Recombinant Anti-NeuN antibody [EPR12763] - Neuronal Marker (ab177487) | 100ul | Abcam |
ab150080 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 594) | 500ug | Abcam |
ab150115 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 647) | 500ug | Abcam |
ab16667 | Recombinant Anti-Ki67 antibody [SP6] (ab16667) | 100ul | Abcam |
AB1187 | Anti-6X His tag®抗體(HRP) | 100ug | Abcam |
ab205718 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) (ab205718) | 500ug | Abcam |
ab278121-1x96tests | Human MASP2 ELISA Kit | 1x96tests | Abcam |
ab102850 | Alkaline phosphatase Conjugation Kit - Lightning-Link® (ab102850) | 1mg | Abcam |
ab205719 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) | 500ug | Abcam |
ab150116 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 594) | 500ug | Abcam |
ab4674-50ul | Anti-GFAP抗體(ab4674) | 50ul | Abcam |
ab32072-100ul | Recombinant Anti-c-Myc antibody [Y69] (ab32072) | 100ul | Abcam |
ab104224-100ug | Anti-NeuN antibody [1B7] - Neuronal Marker | 100ug | Abcam |
ab51995 | AGE-BSA | 10mg | Abcam |
ab240996-1x96tests | CHO HCP ELISA kit (Host cell protein) | 1x96tests | Abcam |
ab208577 | Anti-N6-methyladenosine (m6A) antibody [17-3-4-1] (ab208577) | 100ug | Abcam |
ab290 | Anti-GFP antibody (ab290) | 50ul | Abcam |
ab263899 | Recombinant Anti-NLRP3 antibody [EPR23094-1] (ab263899) | 100ul | Abcam |
ab104139 | Mounting Medium With DAPI - Aqueous, Fluoroshield (ab104139) | 20ml | Abcam |
ab215715 | Recombinant Anti-TGF beta 1 antibody [EPR21143] | 100ul | Abcam |
ab150073 | Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) (ab150073) | 500ug | Abcam |
ab83366 | Iron Assay Kit (Colorimetric) (ab83366) | 100tests | Abcam |
ab178846 | Recombinant Anti-Iba1 antibody [EPR16588] (ab178846) | 100ul | Abcam |
ab171529 | 450 nm Stop Solution for TMB底物 | 100ml | Abcam |
ab150079 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 647) (ab150079) | 500ug | Abcam |
ab5076 | Anti-Iba1 antibody (ab5076) | 100ug | Abcam |
ab15580 | Anti-Ki67 antibody (ab15580) | 100ug | Abcam |
ab184787 | Recombinant Anti-Caspase-3 antibody [EPR18297] (ab184787) | 10ul | Abcam |
ab108823-1x96tests | Human Complement C3 ELISA Kit | 1x96tests | Abcam |
ab51257 | Anti-Polyethylene glycol antibody [PEG-B-47 | 100ug | Abcam |
ab6673-100ug | Anti-GFP antibody | 100ug | Abcam |
ab65329-100tests | Total Antioxidant Capacity Assay Kit | 100tests | Abcam |
ab316860-100ul | 重組Anti-EBV核Antigen/EBNA1抗體[EPR28706-78] (ab316860) | 100ul | Abcam |
ab179515 | 重組Anti-pro Caspase-1 + p10 + p12抗體[EPR16883] | 100ul | Abcam |
ab6326 | Anti-BrdU antibody [BU1/75 (ICR1)] - Proliferation Marker (ab6326) | 100ug | Abcam |
ab7403 | Streptavidin (HRP) | 500ug | Abcam |
ab209845 | Recombinant Anti-GSDMD antibody [EPR19828] (ab209845) | 100ul | Abcam |
ab51608 | Recombinant Anti-HIF-1 alpha antibody [EP1215Y] (ab51608) | 100ul | Abcam |
ab192890 | Recombinant Anti-LC3B antibody [EPR18709] - Autophagosome Marker | 100ul | Abcam |
ab53090 | Anti-Metabotropic Glutamate Receptor 5 antibody (ab53090) | 100ug | Abcam |
ab182422 | 重組Anti-CD163抗體[EPR19518] | 100uL | Abcam |
ab32503 | Recombinant Anti-Bax antibody [E63] (ab32503) | 10ul | Abcam |
ab125066-100ul | Recombinant Anti-Glutathione Peroxidase 4 antibody [EPNCIR144] (ab125066) | 100ul | Abcam |
ab108319 | Recombinant Anti-BDNF antibody [EPR1292] (ab108319) | 100ul | Abcam |
ab181421 | Human TNF alpha ELISA Kit | 1 x 96 tests | Abcam |
ab141704 | Clozapine N-oxide, Metabolite of Clozapine (ab141704) | 100mg | Abcam |
ab16667-500ul | Recombinant Anti-Ki67 antibody [SP6] (ab16667) | 500ul | Abcam |
ab98596 | Goat F(ab')2 Anti-Human IgG - Fc (PE), pre-adsorbed | 500ug | Abcam |
ab208942 | Anti-c-Fos antibody [2H2] (ab208942) | 100ul | Abcam |
ab272686-100ug | Anti-VZV gE蛋白抗體[#9] | 100ug | Abcam |
ab125963-1x96tests | Human Complement C5 ELISA Kit | 1x96tests | Abcam |
ab209959-100ul | Alexa Fluor? 488 Anti-PD-L1 antibody [28-8] | 100ul | Abcam |
ab171529-1000ml | 450 nm Stop Solution for TMB底物 | 1000ml | Abcam |
ab6728 | Rabbit Anti-Mouse IgG H&L (HRP) | 1mg | Abcam |
ab125243 | Anti-DDDDK tag (Binds to FLAG® tag sequence) antibody [FG4R] | 100ug | Abcam |
ab102890 | HRP Conjugation Kit - Lightning-Link® | 3x 100 ug | Abcam |
ab81289-100ul | Anti-CD34 antibody [EP373Y] | 100ul | Abcam |
ab219800-100ul | Recombinant Anti-GSDMD antibody [EPR20859] (ab219800) | 100ul | Abcam |
ab150081 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) preadsorbed (ab150081) | 500ug | Abcam |
ab7260 | Anti-GFAP antibody (ab7260) | 50ul | Abcam |
AB32503-100 | Recombinant Anti-Bax antibody [E63] (ab32503) | 100ul | Abcam |
ab184857 | Human GLP1 (7-36) ELISA Kit | 1 x 96 tests | Abcam |
ab223582 | 重組Anti-EpCAM抗體[EPR20532-225] | 100ul | Abcam |
ab5103 | Anti-Histone H3 (citrulline R2 + R8 + R17) antibody | 100ug | Abcam |
ab97225 | Goat Anti-Human IgG Fc (HRP) | 1mg | Abcam |
ab48394 | Anti-LC3B antibody - Autophagosome Marker (ab48394) | 100ul | Abcam |
ab5929 | Goat F(ab')2 Anti-Mouse IgM mu chain (Biotin) | 250ug | Abcam |
ab18207 | Anti-beta III Tubulin antibody - Neuronal Marker (ab18207) | 100ug | Abcam |
ab64693 | Anti-Mannose Receptor antibody | 100ug | Abcam |
ab179483 | Recombinant Anti-HIF-1 alpha antibody [EPR16897] | 100Ul | Abcam |
ab244926 | 重組Anti-Thymidine Kinase 1/TK1抗體- BSA and Azide free (Detector) | 100ug | Abcam |
ab8245 | Anti-GAPDH antibody [6C5] - Loading Control (ab8245) | 100ug | Abcam |
ab214488-100ul | Recombinant Anti-TROP2 antibody [EPR20043] | 100ul | Abcam |
ab20425-250ul | HRP Anti-E. coli antibody | 250ul | Abcam |
ab106749-100ul | HRP Anti-Growth Hormone antibody [KT34] | 100ul | Abcam |
ab65336-100tests | Triglyceride Assay Kit - Quantification | 100tests | Abcam |
ab213524 | Recombinant Anti-PD-L1 antibody [EPR19759] (ab213524) | 100ul | Abcam |
ab6858 | Goat Anti-Human IgG H&L (HRP) (ab6858) | 1mg | Abcam |
ab197244 | Glycolysis Assay [Extracellular acidification] (ab197244) | 96 tests | Abcam |
ab34710 | Anti-Collagen I antibody (ab34710) | 100ug | Abcam |
ab178945-10ul | Recombinant Anti-iNOS antibody [EPR16635] (ab178945) | 10ul | Abcam |
ab76003-40ul | Recombinant Anti-MMP9 antibody [EP1254] (ab76003) | 40ul | Abcam |
ab68477-10ul | Recombinant Anti-Heme Oxygenase 1 antibody [EPR1390Y] (ab68477) | 10ul | Abcam |
Ab52987 | Recombinant Anti-p75 NGF Receptor antibody [EP1039Y] (ab52987) | 100ul | Abcam |
ab137869 | Recombinant Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody [EP1532Y] (ab137869) | 100ul | Abcam |
ab8227 | Anti-beta Actin antibody (ab8227) | 50ug | Abcam |
ab108821 | Corticosterone ELISA試劑盒(ab108821) | 1 x 96 tests | Abcam |
ab1791 | Anti-Histone H3 antibody - Nuclear Marker and ChIP Grade (ab1791) | 100ug | Abcam |
ab183628 | Anti-mCherry antibody (ab183628) | 100ul | Abcam |
ab243379 | Anti-ZNF18 antibody (ab243379) | 100ul | Abcam |
ab217344 | Recombinant Anti-CD8 alpha antibody [EPR21769] (ab217344) | 10Ul | Abcam |
ab150105 | Donkey Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 488) (ab150105) | 500ug | Abcam |
ab76302 | 重組Anti-NF-kB p65 (phospho S536)抗體[EP2294Y] (ab76302) | 10ul | Abcam |
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