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美國(guó)Activity Signaling公司重組抗Npas4兔單克隆抗體介紹

更新時(shí)間:2025-10-09      點(diǎn)擊次數(shù):989

一、基礎(chǔ)信息

1. 核心產(chǎn)品參數(shù)  

- 貨號(hào):AS-AB18A-100(100μl)、AS-AB18A-300(300μl)  

-英文名:Anti-Npas4 Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody

-中文名:重組抗Npas4兔單克隆抗體

- 品牌:Activity Signaling

- 宿主與類(lèi)型:重組兔單克隆抗體,通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建,避免動(dòng)物個(gè)體差異  

- 形態(tài)與保存:液體形式,1mg/ml濃度溶于PBS,短期4℃保存,長(zhǎng)期-20℃分裝凍存  

2. 靶標(biāo)蛋白Npas4的生物學(xué)意義  

Npas4(Neuronal PAS Domain Protein 4)屬于bHLH-PAS轉(zhuǎn)錄因子家族,是神經(jīng)元活動(dòng)依賴(lài)性的即早基因(IEG)產(chǎn)物。其表達(dá)具有高度神經(jīng)元特異性,僅在突觸活動(dòng)激活后數(shù)分鐘內(nèi)迅速上調(diào),且持續(xù)時(shí)間短暫(約1-2小時(shí)),被認(rèn)為神經(jīng)元活性的黃金標(biāo)志物。Npas4的核心功能包括:  

- 調(diào)控突觸可塑性:通過(guò)激活BDNF等下游基因,平衡興奮性與抑制性突觸(E/I平衡),參與學(xué)習(xí)記憶和恐懼消退。  

- DNA損傷修復(fù):與NuA4復(fù)合物結(jié)合,在神經(jīng)元活動(dòng)誘導(dǎo)的DNA斷裂位點(diǎn)募集修復(fù)蛋白,維持基因組穩(wěn)定性,延緩神經(jīng)退行性變。  

- 晝夜節(jié)律調(diào)節(jié):與BMAL1等時(shí)鐘基因互作,調(diào)控視交叉上核(SCN)對(duì)光信號(hào)的響應(yīng)。  

- 疾病關(guān)聯(lián):其異常表達(dá)與精神分裂癥、自閉癥、癲癇及阿爾茨海默病等密切相關(guān)。  

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二、作用原理

1. 抗體設(shè)計(jì)與制備  

該抗體通過(guò)重組DNA技術(shù)構(gòu)建,具體流程包括:  

- 抗原篩選:以Npas4蛋白C端保守區(qū)域(人源氨基酸597-802)為免疫原,確??缥锓N識(shí)別(小鼠、大鼠、人類(lèi))。  

- 單B細(xì)胞克隆:從免疫兔外周血分離特異性B細(xì)胞,測(cè)序獲取抗體可變區(qū)基因。  

- 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá):將抗體基因?qū)際EK293細(xì)胞,通過(guò)無(wú)血清懸浮培養(yǎng)大規(guī)模生產(chǎn),避免動(dòng)物源污染。  

- 嚴(yán)格純化:經(jīng)Protein A親和層析和SEC分子篩純化,純度>95%,內(nèi)毒素水平<0.1EU/μg。  

2. 作用機(jī)制  

抗體通過(guò)雙價(jià)Fab片段特異性結(jié)合Npas4蛋白的PAS結(jié)構(gòu)域,阻斷其與ARNT等伴侶蛋白的相互作用,從而抑制轉(zhuǎn)錄活性。該結(jié)合具有高度選擇性:  

- 種屬交叉反應(yīng)性:通過(guò)小鼠、大鼠及人類(lèi)腦組織樣本驗(yàn)證,在WB中均顯示單一87kDa條帶。  

- 亞細(xì)胞定位:免疫熒光(IF)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其與DAPI共定位,提示抗體可穿透細(xì)胞核膜,識(shí)別內(nèi)源性Npas4。  

- 功能驗(yàn)證:在Npas4基因敲除(KO)小鼠中無(wú)信號(hào),證明抗體無(wú)交叉反應(yīng)。

 

三、實(shí)驗(yàn)痛點(diǎn)解決方案

1. 傳統(tǒng)抗體的局限性  

- 特異性不足:多克隆抗體因識(shí)別多個(gè)表位,易與PAS家族其他成員(如NPAS1、NPAS3)交叉反應(yīng),導(dǎo)致WB背景高或IHC假陽(yáng)性。  

- 批次間差異:雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的小鼠單抗可能因細(xì)胞株遺傳漂變,導(dǎo)致不同批次效價(jià)波動(dòng)。  

- 驗(yàn)證困難:缺乏KO模型驗(yàn)證的抗體難以排除非特異性結(jié)合,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)論可信度。  

2. 本產(chǎn)品的針對(duì)性?xún)?yōu)化  

- KO驗(yàn)證黃金標(biāo)準(zhǔn):在Npas4 KO小鼠腦裂解液中無(wú)信號(hào),排除與其他bHLH-PAS蛋白的交叉反應(yīng)。  

- 多應(yīng)用場(chǎng)景適配:支持WB(1:500-1:2000)、IHC(1:100-1:500)、ICC/IF(1:200-1:1000),滿(mǎn)足從分子到組織水平的檢測(cè)需求。  

- 即用型設(shè)計(jì):1mg/ml高濃度溶液可直接使用,避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的抗體降解。  

- 兼容性擴(kuò)展:可與cFos、Arc等其他IEG抗體聯(lián)用,實(shí)現(xiàn)多標(biāo)記神經(jīng)元活動(dòng)分析。

 

四、核心優(yōu)勢(shì)

1. 特異性與靈敏度的雙重提升  

- 高親和力結(jié)合:通過(guò)表面等離子共振(SPR)測(cè)定,抗體與Npas4的KD值達(dá)10?? M級(jí),可檢測(cè)低至0.1ng的重組蛋白。  

- 背景信號(hào)抑制:在IHC實(shí)驗(yàn)中,對(duì)小鼠睪丸等非表達(dá)組織無(wú)染色,證明其嚴(yán)格的組織特異性。  

2. 批次穩(wěn)定性與生產(chǎn)可靠性  

- 基因?qū)用嬉恢滦裕褐亟M抗體的DNA序列恒定,避免雜交瘤細(xì)胞突變導(dǎo)致的批次差異。  

- 規(guī)?;a(chǎn)能力:哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)產(chǎn),供貨周期短至2周。  

3. 實(shí)驗(yàn)效率優(yōu)化  

- 省時(shí)省力:無(wú)需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化稀釋度,推薦起始濃度直接適用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)條件。  

- 兼容多種檢測(cè)平臺(tái):與HRP、Alexa Fluor等標(biāo)記二抗配合,支持化學(xué)發(fā)光、熒光顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)。  

4. 應(yīng)用領(lǐng)域擴(kuò)展  

- 神經(jīng)科學(xué)研究:用于神經(jīng)元活動(dòng)圖譜繪制、突觸可塑性機(jī)制解析及神經(jīng)退行性疾病模型驗(yàn)證。  

- 藥物研發(fā):作為靶點(diǎn)驗(yàn)證工具,評(píng)估候選化合物對(duì)Npas4通路的調(diào)控作用。  

- 高級(jí)成像技術(shù):與組織透明化試劑盒(如CLARITY)聯(lián)用,實(shí)現(xiàn)全腦3D成像。  


五、客戶(hù)群體與典型應(yīng)用案例

1. 核心用戶(hù)

- 神經(jīng)科學(xué)實(shí)驗(yàn)室:研究突觸可塑性、學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)退行性疾病的機(jī)制。  

- 精神疾病研究機(jī)構(gòu):探索Npas4在自閉癥、抑郁癥等中的分子病理。  

- 藥物研發(fā)企業(yè):開(kāi)發(fā)靶向Npas4通路的小分子抑制劑或基因療法。  

- 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室:研究神經(jīng)元活動(dòng)誘導(dǎo)的基因表達(dá)動(dòng)態(tài)變化。  

2. 代表性實(shí)驗(yàn)方案  

- WB檢測(cè)神經(jīng)元激活:  

 - 樣本:小鼠海馬組織裂解液(35μg蛋白/泳道)。  

 - 條件:抗體稀釋1:1000,4℃孵育過(guò)夜,HRP標(biāo)記二抗1:5000,ECL顯影曝光30秒。  

 - 結(jié)果:在野生型小鼠中顯示清晰87kDa條帶,KO小鼠無(wú)信號(hào)。  

- IHC定位Npas4表達(dá):  

 - 樣本:大鼠腦冠狀切片(4%多聚甲醛固定)。  

 - 條件:抗體稀釋1:200,37℃孵育2小時(shí),DAB顯色后蘇木精復(fù)染。  

 - 結(jié)果:特異性染色集中于海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞核,背景極低。  

- IF檢測(cè)原代神經(jīng)元激活:  

 - 樣本:體外培養(yǎng)的小鼠皮層神經(jīng)元(經(jīng)KCl刺激30分鐘)。  

 - 條件:抗體稀釋1:500,與MAP2抗體共染,Alexa Fluor 488標(biāo)記二抗,激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察。  

 - 結(jié)果:Npas4信號(hào)與MAP2陽(yáng)性神經(jīng)元共定位,且刺激組熒光強(qiáng)度顯著高于對(duì)照組。


六、訂貨信息與技術(shù)支持

1. 產(chǎn)品規(guī)格與價(jià)格  

- 100μl裝:AS-AB18A-100

- 300μl裝:AS-AB18A-300

- 定制服務(wù):提供HRP、Biotin等標(biāo)記偶聯(lián)抗體,及大包裝批量采購(gòu)優(yōu)惠。  

2. 訂購(gòu)流程  

-供應(yīng)商:上海起發(fā)


七、總結(jié)

Anti-Npas4重組兔單克隆抗體(AS-AB18A系列)憑借重組技術(shù)的精準(zhǔn)性、嚴(yán)格的KO驗(yàn)證及多場(chǎng)景兼容性,成為神經(jīng)科學(xué)研究的工具。其高特異性、批次穩(wěn)定性及實(shí)驗(yàn)效率,不僅解決了傳統(tǒng)抗體的痛點(diǎn),更助力研究者在神經(jīng)元活動(dòng)機(jī)制、神經(jīng)退行性疾病及藥物研發(fā)領(lǐng)域取得突破性進(jìn)展。選擇該抗體,即選擇了可靠、高效、前沿的實(shí)驗(yàn)解決方案。  


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