內(nèi)切糖苷酶

- 內(nèi)切
糖苷酶從清潔制劑中的糖蛋白 - 高度穩(wěn)定的酶切割完整的聚糖 - 不含甘油，NaCl或其他添加劑，如EDTA。
- 測(cè)試所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

內(nèi)切糖苷酶是用于分析糖蛋白的廣泛使用的酶。這些酶從糖蛋白釋放完整的聚糖，而外切糖苷酶釋放單個(gè)單糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙?；咸前?，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶組中，因?yàn)槠淝懈钔暾腘-連接聚糖的活性相似，盡管它實(shí)際上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的個(gè)β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之間切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之間切割N-連接的聚糖，留下帶電荷的殘基，其有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度，降低蛋白質(zhì)聚集體沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-連接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定類(lèi)型的N-連接聚糖。

酶的這種分類(lèi)還包括O-糖苷酶，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中除去核心1O-連接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。O-連接的聚糖通常含有在分支和線(xiàn)性連接中與半乳糖連接的另外的單糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶來(lái)除去額外的糖。

內(nèi)切糖苷酶有以下幾個(gè)品牌產(chǎn)品：

（一）qa-bio E-PNG01

PNGase F.

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖。

產(chǎn)品編號(hào) - 酶的量
E-PNG01 - 60μLs¹

E -PNG01-20 - 20μLs¹

E -PNG01-200 - 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括緩沖液，變性劑和Triton- 
   X²僅含酶

¥ 1,313.38 - ¥ 9,806.55

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖。該酶將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。變性增加了解理速率。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化，但必須增加孵育時(shí)間。酶在反應(yīng)條件（37℃）下保持*活性至少96小時(shí)。PNGase F不會(huì)去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有許多替代酶可用于去除N-聚糖，特別是Endo F家族的酶和Endo H.這些酶切割寡糖核心中的兩個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基，產(chǎn)生截短的糖在天冬酰胺上殘留一個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基的分子。這留下帶電荷的糖，其可以幫助將蛋白質(zhì)保持在溶液中，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些雜合型N-聚糖。Endo F2將去除雙觸角和高甘露糖（降低40倍速率）。Endo F3釋放出triantennarry和巖藻糖基化的雙觸角N-聚糖。遠(yuǎn)藤H. 去除雜交或高甘露糖聚糖。

來(lái)源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

內(nèi)容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包裝尺寸：
5x反應(yīng)緩沖液7.5 - 250 mM磷酸鈉，pH 7.5 
變性溶液 - 2％SDS，1Mβ-巰基乙醇
Triton X-100 - 15％溶液

比活力 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道爾頓

pH范圍 6-10，適7.5

方案
1.在Eppendorf管中加入高達(dá)200μg的糖蛋白。用去離子水調(diào)節(jié)至35μl終體積。
2.加入10μl5x反應(yīng)緩沖液7.5和2.5μl變性溶液。在100°C加熱5分鐘。
很酷。加入2.5μlTritonX-100并混合。
4.向反應(yīng)中加入2.0μl酶。在37°C孵育3小時(shí)。

特異性切除所有天冬酰胺連接的復(fù)合物，雜交或高甘露糖寡糖，除非α（1-3）核心巖藻糖基化; 天冬酰胺必須在兩個(gè)末端肽結(jié)合，Endo F游離

比活性定義為在37℃，pH7.5下在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性的RNase B釋放N-連接的寡糖所需的酶量。通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)測(cè)切割（切割的RNase B遷移更快）。

儲(chǔ)存在4°C儲(chǔ)存酶。

（二）ludger

酶（內(nèi)切和外切糖苷酶）包括LudgerZyme™（LZ）產(chǎn)品

內(nèi)切糖苷酶：

從糖蛋白切割聚糖的酶

• PNGase F（肽N糖苷酶F）

  E-PNG01

  PNGase F（QABio）。足以進(jìn)行多達(dá)60次反應(yīng)。

  0.3 U /60μl。試劑盒包括酶加反應(yīng)緩沖液。

  酶學(xué)委員會(huì)編號(hào)：EC 3.5.1.52

• E-PNG05

  PNGase F（QABio）。足以達(dá)到200次反應(yīng)。

  1 U /200μl。僅含酶。

  酶學(xué)委員會(huì)編號(hào)：EC 3.5.1.52

• 重組PNGase F.

  E-rPNG01

  重組PNGase F（QABio）。足以進(jìn)行多達(dá)60次反應(yīng)。

  0.3 U /60μl。試劑盒包括酶加反應(yīng)緩沖液。

  酶學(xué)委員會(huì)編號(hào)：EC 3.5.1.52

• LZ-rPNGaseF-kit *新產(chǎn)品*

  LudgerZyme重組PNGase F試劑盒（New England BioLabs）。足以進(jìn)行多達(dá)150次反應(yīng)。

  150μl。試劑盒包括酶加反應(yīng)緩沖液。

  酶學(xué)委員會(huì)編號(hào)：EC 3.5.1.52

（三）neb 

P0704S

濃度

500,000單位/毫升

尺寸

15,000個(gè)單位

價(jià)格表

$ 180.00

P0704L

濃度

500,000單位/毫升

尺寸

75,000個(gè)單位

價(jià)格表

$ 718.00

PNGase F.

PNGase F是從糖蛋白中去除幾乎所有N-連接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶，其在高甘露糖，雜合和復(fù)合寡糖的內(nèi)部GlcNAc和天冬酰胺殘基之間切割。 

• 通過(guò)SDS-PAGE和完整的ESI-MS測(cè)定，純度≥95％
• 非重組，沒(méi)有可檢測(cè)的內(nèi)切糖苷酶F1，F(xiàn)2或F3污染
• 儲(chǔ)存在50％甘油中; 適活動(dòng)和穩(wěn)定性長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月
• 可在天然或變性條件下使用
• 優(yōu)化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整，適合進(jìn)一步分析

（四）promega

PNGase F

Catalog number selected: V4831

PNGase F( 肽N- 糖苷酶F) 是一個(gè)重組糖苷酶，從Elizabethkingia miricola 克隆

• 用于測(cè)定蛋白糖基化狀態(tài)和位置
• 可在N- 連糖蛋白的高甘露糖、雜合和復(fù)合寡糖部分內(nèi)側(cè)的 N- 乙酰葡萄糖胺(GlcNAc) 和天冬酰氨殘基之間進(jìn)行切割。
• 不會(huì)去除常見(jiàn)植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 巖藻糖連接的寡糖。
• 產(chǎn)品以10u/μl濃度提供

PNGase F, 重組糖苷酶

PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一個(gè)重組糖苷酶，從 Elizabeth-kingia miricola 克隆，并在大腸桿菌中過(guò)表達(dá)獲得。PNGase F 的分子量為 36kDa,  可以在 N-連糖蛋白的高甘露糖、雜合和復(fù)合寡糖部分內(nèi)側(cè)的 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間進(jìn)行切割（圖1）。PNGase F 不會(huì)去除常見(jiàn)植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 巖藻糖連接的寡糖。

單位定義：一單位 PNGase F 指在 37℃可以 1 分鐘內(nèi)催化 1nm 變性核糖核酸酶 B（RNase B）去糖基化所需 PNGase F 的量。1 Promega 單位等于 1 IUB 毫單位。

分子量：PNGase F 分子量約為 36kDa 。

物理形態(tài)：PNGase F 溶于 20mM Tris-HCl（pH 7.5，25℃），50mM NaCl和 5mM EDTA緩沖液中，濃度為10,000u/ml。

應(yīng)用：

• 蛋白是否被糖基化的特征

• 確定蛋白的糖基化位點(diǎn)

• 聚糖結(jié)構(gòu)特征

• 蛋白運(yùn)輸

Cleavage specificity of PNGase F on N-Glycans.

Cleavage specificity of PNGase F on N-Glycans.

Recombinant PNGase F deglycosylates multiple substrates.

Recombinant PNGase F deglycosylates multiple substrates.

Schematic illustrating the use of PNGase F and mass spec analysis of N-glycosylation.

Schematic illustrating the use of PNGase F and mass spec analysis of N-glycosylation.